Editorial:
En esta edición Revista Bioanálisis les acerca a sus lectores y patrocinantes información sobre herramientas bioquímicas y moleculares en el área clínica y conocimientos de los avances en el uso de tecnologías aplicadas al diagnóstico. Contiene un artículo que expone la importancia de conocer los distintos genotipos y subgenotipos así como las localizaciones y desplazamientos de la hepatitis en la Argentina. También incluye una explicación de los estudios necesarios para llegar al diagnóstico integral de la infección por el Virus del Papiloma Humano, una descripción de los aportes de la biología molecular en el tratamiento y seguimiento de pacientes con el Virus de la Inmunodeficiencia Humana (VIH), además de una nota sobre un nuevo Elisa de 3ra generación que permite la detección de anticuerpos contra el VIH-1 y el VIH-2. Por otro lado, presenta las pruebas microbiológicas para diagnosticar la artritis séptica, los nuevos métodos de inmunoensayo automatizados que permiten prevenir la preeclampsia; la utilización de la Reacción en Cadena de la Polimerasa (PCR) en tiempo real aplicada a la identificación de patógenos, un procedimiento directo para la tipificación de un agente infeccioso, un claro ejemplo de que el uso de las técnicas moleculares por parte de los laboratorios clínicos es algo que se ha extendido en los últimos tiempos y por último el trabajo de la Dra. Benozzi y el Dr. Coniglio describe los biomarcadores plasmáticos emergentes de la arterosclerosis que resultan fundamentales para evitar el número de muertes que esta enfermedad produce.
Dr. Gerardo De Blas
Director de Contenidos
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Nota 1: El mapa de la hepatitis en Argentina.
La hepatitis es una enfermedad inflamatoria que afecta al hígado. Su causa puede ser de origen infecciosa, ya sea viral, bacteriana, entre otras; inmunitaria como la hepatitis autoinmune o tóxica debida a la ingesta de alcohol o fármacos. Este informe describe el estudio realizado por investigadores de la Facultad de Farmacia y Bioquímica (FFyB) de la Universidad de Buenos Aires sobre las distintas variantes genéticas de los virus de la hepatitis en la Argentina, sus investigaciones están focalizadas en los virus de la hepatitis B y C, explicando la importancia de conocer el mapa de los distintos genotipos y subgenotipos, así como sus localizaciones y desplazamientos en el territorio argentino, ya que resulta de utilidad para prevenir las infecciones, prever el curso que desarrollará la enfermedad, seleccionar los tratamientos más apropiados, como también para el futuro desarrollo de antivirales y vacunas. La gravedad que pueda adquirir la enfermedad, y la posibilidad de responder a los tratamientos disponibles, dependen fuertemente del genotipo viral.
Por Amalia Beatriz Dellamea
Resumen:
Investigadores de la Facultad de Farmacia y Bioquímica (FFyB) de la Universidad de Buenos Aires estudian las distintas variantes genéticas del virus de la hepatitis en la Argentina. Mejor dicho, de “los virus” de la hepatitis, en tanto que estos microorganismos patógenos han consti-tuido una familia muy prolífica en el mundo.
Focalizan sus investigaciones en los virus de la hepatitis B y C, dado que las infecciones se hacen crónicas y, en el largo plazo, representan gravísimos problemas de salud pública.
Conocer el “mapa” de los distintos genotipos y subgenotipos, así como sus localizaciones y desplazamientos en el territorio argentino, resulta de utilidad para prevenir las infecciones, prever el curso que desarrollará la enfermedad, seleccionar los tratamientos más apropiados, como también para el futuro desarrollo de antivirales y vacunas. De hecho, los investigadores, junto con otros científicos también de la FFyB , ya desarrollaron y patentaron un antiviral que podía resultar promisorio ya que demostró in vitro eficacia para combatir al virus de la diarrea bovina, que es un “pariente” del virus de la hepatitis C.
La primera parte de este informe estará destinado al virus de la hepatitis B (VHB) y la segunda, al virus de la hepatitis C (VHC).
Nota 2: Diagnóstico integral de infección por HPV.
El Virus del Papiloma Humano (HPV) es el causante de la enfermedad de transmisión sexual con mayor incidencia en el mundo, está presente en casi el 100 % de los cánceres de cérvix y es el segundo cáncer más frecuente en la población femenina. Su detección y tipificación en muestras biológicas se realiza exclusivamente por técnicas de biología molecular debido a que el cultivo y propagación in vitro son impracticables y los métodos serológicos poco sensibles. La citología (únicamente) es poco sensible (50-70 %) en la detección de estas lesiones, pero el uso combinado con la detección de ADN eleva este porcentaje a casi el 100 %. Son los estudios de ADN de HPV los que permiten la estratificación de las lesiones, orientar la conducta terapéutica y evaluar el pronóstico. Estos reducen el número de colposcopias y biopsias innecesarias. Sin embargo, la metodología para control de calidad y evaluación del comportamiento analítico de estos nuevos ensayos está aún poco estandarizada. MANLAB ofrece todos los estudios necesarios para llegar al diagnóstico de la infección por HPV, incluyendo las pruebas de screening, principales métodos en uso para su diagnóstico.
Dr. Daniel Pirola
Resumen:
El Virus del Papiloma Humano (HPV) pertenece a la familia Papillomaviridae. Este virus posee un genoma de ADN de doble cadena de aproximadamente 8000 pares de bases de forma circular, no poseen envoltura y la simetría de la cápside icosaédrica.
Existen numerosas especies de HPV, su clasificación se realiza en base a la homología de la secuencia de ADN en tipos virales. Se han identificado no menos de 100 tipos diferentes de los cuales se agrupan en 16 grupos denominados en letras de A a P de acuerdo a su similitud. Asimismo, pueden clasificarse de acuerdo al tropismo por epitelios específicos susceptibles en HPV cutáneos y HPV mucosos, dentro de este último grupo se encuentran los HPV asociados al Cáncer Cervical o Cáncer de Cuello Uterino.
El virus codifica dos tipos de pro-teínas, las estructurales o tardías que forman su cápside: L1 y L2 y las proteínas de expresión temprana: E1 a E8.
La infección por HPV se adquiere por contacto directo y es en general especie específica. El HPV causa la enfermedad de transmisión sexual con mayor incidencia en el mundo y en algunos grupos hasta el 80 % de la población sexualmente activa se ha infectado con un tipo de HPV. En muchos casos pueden coexistir infecciones con múltiples tipos virales.
Nota 3: Nuevos aportes de la Biología Molecular al tratamiento y seguimiento de pacientes infectados con el VIH-1
El SIDA es una enfermedad infecciosa que ataca al sistema inmunológico. Es provocado por un virus que se llama Virus de la Inmunodeficiencia Humana (VIH, en inglés HVI). Los avances alcanzados en los últimos años han disminuido notablemente la morbimortalidad de los pacientes infectados por el VIH. Los estudios genómicos han revolucionado distintas áreas de la medicina, permitiendo identificar variantes genéticas en aquellos genes que influyen en los mecanismos de producción de enfermedades, de reacciones adversas y de variaciones en la respuesta al tratamiento. El estudio farmacogenético ha permitido conocer la respuesta a las drogas antirretrovirales según la constitución genética del húesped, permitiéndole, en muchos casos, mejor calidad de vida. En esta nota Laboratorios Stamboulian nos cuenta sus nuevos aportes en Biología Molecular para el tratamiento y seguimiento de pacientes con VIH, esto ayudará a mejorar significativamente la seguridad de los medicamentos evitando graves efectos adversos en los pacientes y le permitirá al médico tomar decisiones clínicas adecuadas.
Bioq. Sonia Castillo
Resumen:
La combinación de drogas antirretrovirales para el tratamiento de la infección por el virus de la inmunodeficiencia humana tipo 1 (VIH-1) comprende generalmente 3 grupos de drogas: inhibidores nucleosídicos y nucleotídicos de la transcriptasa reversa (RT), inhibidores no nucleosídicos de la RT e inhibidores de la proteasa (PR). La emergencia de cepas resistentes de VIH-1 a estos agentes antirretrovirales, así como la toxicidad debida a drogas afectó la eficacia del tratamiento y llevó a la necesidad de desarrollar nuevos fármacos antirretrovirales dirigidos hacia nuevos blancos de acción. En este nuevo grupo se encuentran los inhibidores de entrada (inhibidores del correceptor e inhibidores de fusión) y los inhibidores de la integración del VIH-1. Al primer grupo pertenece el maraviroc, droga que actúa únicamente en presencia del correceptor CCR5, y un ejemplo del último grupo es el raltegravir, ambos analizados más abajo.
Mecanismo de entrada del VIH-1 a la célula huésped:
Otro aspecto relevante en la respuesta a las drogas antirretrovirales es la constitución genética del húesped, sobre todo en lo que se refiere al metabolismo y a la toxicidad de las drogas. En los últimos años, los estudios genómicos han revolucionado distintas áreas de la medicina, permitiendo identificar variantes genéticas en aquellos genes que influyen en los mecanismos de producción de enfermedad, de reacciones adversas y de variaciones en la respuesta al tratamiento. El estudio farmacogenético de antirretrovirales mejor conocido se realizó para el abacavir, droga que requiere una prueba genética antes de administrarse, y que se presenta más adelante en este artículo.
En nuestro laboratorio, se han desarrollado y validado estos estudios genéticos, que examinan tanto el genoma viral como el del paciente por tratar, para ayudar al médico en las decisiones clínicas.
Inhibidores del correceptor CCR5:
El VIH-1 entra a la célula utilizando como receptor primario las moléculas CD4, y como correceptor uno de los receptores de quemoquinas: CCR5 o CXCR4. Según cuál sea el correceptor utilizado, las variantes trópicas de VIH-1 se clasifican en R5, X4 o R5X4 (tropismo dual o mixto).
Nota 4: Diagnóstico microbiológico de artritis séptica.
Esta nota describe las vías de infección, los factores predisponentes y los diferentes agentes etiológicos causantes de la artritis séptica, así como las pruebas diagnósticas de laboratorio que permiten establecer un tratamiento adecuado para esta enfermedad. La artritis, es un proceso inflamatorio agudo de las articulaciones y del tejido sinovial causado fundamental-mente por microorganismos piógenos, aunque también puede deberse a causas inmunológicas, traumáticas o por cristales, que dan lugar a la destrucción rápida del espacio articular. Su determinación requiere de un abordaje multidisciplinario y de la interpretación conjunta de pruebas radiológicas, de medicina nuclear, de determinaciones bioquímicas, de los estudios de anatomía patológica y de los resultados microbiológicos. Estos últimos son muy importantes, ya que el aislamiento en cultivo de los microorganismos responsables y la determinación de sus patrones de sensibilidad permitirán un diagnóstico rápido y preciso de la enfermedad.
Rolando Soloaga phD
Resumen:
Las articulaciones son las áreas en donde dos o más huesos se unen. La mayor parte de las articulaciones son móviles, por lo que permiten que los huesos puedan moverse. Las articulaciones están formadas por:
Cartílago:en la articulación, los huesos están recubiertos de cartílago, un tejido conjuntivo resistente al desgaste que está formado por células y fibras. El cartílago ayuda a reducir la fricción que producen los movimientos.
Membrana sinovial: tejido que reviste la articulación y la encierra en la cápsula de la articulación. La membrana sinovial secreta líquido sinovial (un líquido transparente y pegajoso) alrededor de la articulación para lubricarla.
Ligamentos: los ligamentos fuertes (bandas de tejido conjuntivo resistente y elástico) circundan la articulación para sostenerla y limitar sus movimientos.
Tendones: los tendones (otro tipo de tejido conjuntivo resistente), situados a ambos lados de la articulación, se conectan a los músculos que controlan los movimientos de la misma.
Bursas: bolsas llenas de líquido situadas entre los huesos, ligamentos u otras estructuras adyacentes, que ayudan a amortiguar la fricción en una articulación.
- líquido sinovial - líquido transparente y pegajoso secretado por la membrana sinovial.
La artritis es la inflamación de las articulaciones y del tejido sinovial, la misma puede ser infecciosa o no. La incidencia publicada de artritis séptica varía desde 2 a 5 cada 100.000 personas por año en una población general, pero puede alcanzar valores de 28 a 38 cada 100.000 por año entre pacientes con artritis reumatoidea y 40 a 68 cada 100.000 por año entre las personas con una prótesis articular.
Nota 5: Roche brinda novedosas herramientas para el diagnóstico temprano de la preeclampsia.
Roche ha lanzado al mercado innovadoras pruebas de inmunoensayos automatizadas que ofrecen importantes avances en el diagnóstico y el tratamiento de la preeclampsia, una enfermedad potencialmente mortal para las embarazadas y su feto. Estos nuevos ensayos estandarizados detectan dos nuevos biomarcadores a través de una prueba de inmunoensayo, denominada Elecsys® PlGF y Elecsys® sFlt-1; la cual brinda resultados claros y confiables con una especificidad del 95% y una sensibilidad del 82% y permite a los médicos monitorear estrechamente a las mujeres, así como asesorarlas sobre la necesidad de dar inicio de intervenciones oportunas tanto para la madre como para el niño.
Productos Roche S.A.Q.e I.
Resumen:
Se trata de los primeros inmunoensayos totalmente automatizados para los biomarcadores sFlt-1 y PlGF. Proporcionan a los profesionales médicos herramientas específicas para la individualización de las embarazadas en riesgo y su posterior monitoreo. Los inmunoensayos Elecsys® sFlt-1 y PlGF de Roche son innovadoras pruebas de laboratorio que ofrecen importantes avances tanto para el diagnóstico como para el tratamiento de la preeclampsia. Esta enfermedad afecta a las embarazadas y pone en riesgo su vida y la del feto.
La preeclampsia es una complicación común y potencialmente grave del embarazo que afecta tanto a la madre como al niño que aún no ha nacido. Esta enfermedad es una de las principales causas de parto pretérmino y la consiguiente morbilidad y mortalidad neonatal.
Aparece en el 3 a 5 por ciento de los embarazos y se caracteriza por hipertensión materna y por la presencia de proteinuria igual o mayor de 0.3gr/24 hs. Pese a que cualquier mujer embarazada puede verse afectada, se encuentra documentado que ciertos grupos presentan riesgo aumentado: mujeres nulíparas, gestantes mayores de 40 años, portadoras de embarazos múltiples, etc.
Dado que la preeclampsia sólo puede resolverse por el nacimiento del feto, el objetivo del médico es tratar la enfermedad materna y, a la vez, proporcionar al feto el tiempo que necesita para madurar y desarrollarse.
El pronóstico, a su vez, depende de la etapa del embarazo en la que ocurra. Por lo general, se diagnostica con mayor frecuencia después de la semana 32-34 de gestación y, cuando aparece tempranamente (20-34 semanas), está asociada con amenazas graves para la salud de la madre y del feto.
Nota 6: Diagnóstico Molecular: Una nueva herramienta en la detección de patógenos. PCR en Tiempo Real
La biología molecular es una herramienta utilizada en el diagnóstico clínico o biomédico en muchos laboratorios de microbiología, oncología, oncohematología y genética. En la siguiente nota Tecnolab nos presenta la utilización de la Reacción en Cadena de la Polimeraza (PCR) en tiempo real, para la detección de patógenos, su fundamento, sus ventajas y los requisitos necesarios para llevar a cabo esta técnica en el laboratorio. Esta empresa por intermedio de Qiagen, provee todos los elementos para poder implementar este tipo de diagnóstico.
Lic. Florencia Bialade
En los últimos años, la reacción en cadena de la polimerasa (PCR) en tiempo real “Real Time PCR” ha surgido como una metodología robusta y extensamente utilizada para la investigación biológica, ya que puede identificar y cuantificar cantidades muy pequeñas de Ácidos Nucleicos (ADN y ARN) en forma específica.
Su tecnología permite determinar en forma rápida y exacta cambios en la expresión génica resultantes de fenómenos fisiológicos o patológicos. De esta manera es posible correlacionar la fisiopatología con los eventos moleculares, lo que permite un mayor entendimiento de los procesos biológicos.
En la PCR en tiempo real, los procesos de amplificación del ADN o ARN y la detección, se producen de manera simultánea dentro del mismo vial cerrado, sin necesidad de ninguna acción posterior. Además, mediante detección por fluorescencia se puede medir durante la amplificación la cantidad de ADN sintetizado en cada momento, ya que la emisión de fluorescencia producida en la reacción se relaciona con la cantidad de ADN formado. Esto permite conocer y registrar en todo momento la cinética de la reacción de amplificación.
El diagnóstico clínico o biomédico, algunos años más tarde, ha tomado esta metodología también como herramienta de trabajo, y hoy en día es habitual encontrar que se lleva a cabo en muchos laboratorios de microbiología, oncología, oncohematología, genética, etc., para aplicaciones tales como diagnóstico e identificación de patógenos, medición de carga virales y bacterianas, identificación de resistencia a los tratamientos, medición de la expresión génica, determinación y cuantificación de translocaciones, entre muchísimas otras.
Métodos de detección directa o indirecta de los agentes infecciosos: El paso hacia el diagnóstico molecular
Nota 7: Evaluación de un Nuevo Elisa para la detección de anticuerpos anti-HIV-1 y anti-HIV-2 de 3ª generación.
El virus de la inmunodeficiencia humana (HIV) infecta a las células del sistema inmunitario, alterando o anulando su función. La infección produce un deterioro progresivo del sistema inmunitario, con la consiguiente "inmunodeficiencia". El síndrome de inmunodeficiencia adquirida (SIDA) es un término que se aplica a los estadios más avanzados de la infección por HIV. Es muy importante en estos pacientes ofrecerle una buena calidad de vida, para esto es trascendental su detección. En esta nota Wiener lab nos presenta un nuevo ELISA para la detección de anticuerpos anti-HIV-1 y anti-HIV-2 de 3º generación.
Malacrida, C; Capriotti, G. A. y Torruella.
Resumen:
Los virus de la inmunodeficiencia humana HIV-1 y HIV-2 son los agentes causales del Síndrome de la Inmunodeficiencia Adquirida (SIDA). Estos retrovirus se transmiten por contacto con fluidos corporales infectados tales como sangre o productos derivados de la misma, secreciones genitales y por pasaje a través de la placenta. Evidencia serológica de la infección por estos virus puede obtenerse determinando la presencia de anticuerpos en suero o plasma de individuos en los que se sospecha infección. Se ha desarrollado un nuevo producto denominado HIV 1+2 ELISA 3ª generación para la detección de anticuerpos contra HIV-1, HIV-1 grupo O y HIV-2 en suero o plasma.
El diseño de los ELISA de tercera generación (sándwich de antígeno) permite un gran avance para acortar el período ventana, ya que puede detectar otras inmunoglobulinas como IgM e IgA que se encuentran presentes durante la seroconversión además de presentar una mayor sensibilidad analítica para IgG.
Nota 8: La Aterosclerosis: Biomarcadores Plasmáticos Emergentes.
Cada año por las complicaciones trombóticas que ocasiona la aterosclerosis se produce un significativo número de muertes. Si bien son conocidos los principales factores de riesgo de esta enfermedad que afecta a las arterias del cuerpo, principalmente las del corazón, del cerebro, del riñón y las de los miembros inferiores, éstos no explican la totalidad de los casos en los que se presenta. En este trabajo la Dra. Benozzi y el Dr. Coniglio nos describen la fisiopatología del aterosclerosis y los biomarcadores plasmáticos emergentes, conocer nuevos biomarcadores resultan de utilidad para su prevención, diagnóstico, pronóstico, monitoreo del tratamiento y predicción de la recurrencia.
Silvia Benozzi, Raúl Ignacio Coniglio.
Resumen:
La aterosclerosis y sus complica cionestrombóticas son causa de un significativo número de muertes cada año. Aunque los factores de riesgo principales son conocidos, éstos no explican la totalidad de los casos en que se presenta la enfermedad y existe considerable interés por introducir nuevos marcadores. Estos podrían ser utilizados en la prevención, diagnóstico, pronóstico, monitoreo del tratamiento y predicción de la recurrencia de la enfermedad. Los objetivos de este trabajo son describir: a) la fisiopatología del aterosclerosis; b) los biomarcadores plasmáticos emergentes. Se han identificado biomarcadores plasmáticos de: inflamación, activación de la célula endotelial, estrés oxidativo, crecimiento angiogénico, activación plaquetaria, trombosis y también apolipoproteínas, lipoproteínas y otras moléculas, algunos de los cuales podrían ser útiles en un futuro próximo. Sin embargo, deben conocerse aspectos vinculados con la información pre-analítica, analítica y post-analítica para cada uno de ellos antes de su utilización. La proteína C reactiva y la apolipoproteína B son dos probables incorporaciones para la práctica clínica, aunque todavía se necesitan considerables esfuerzos para lograr un consenso sobre su utilización. Será necesario optimizar el uso de los biomarcadores para evitar aumentar los costos en la detección y manejo de la enfermedad.
Nota 9: Entrevista a la Dra. América Elda Nancy Arimany de Turner y el Dr. Diego Eduardo Turner Fundadores de Laboratorios TURNER – Rosario.
Laboratorios TURNER, fundado en 1964 en la ciudad de Rosario, Argentina por los doctores América Arimany de Turner y Diego Turner es un laboratorio de análisis clínicos de alta y baja complejidad. Sus actividades siempre estuvieron orientadas a la endocrinología, convirtiéndose en el primer laboratorio del interior del país en utilizar la técnica de radioinmunoensayo. Actualmente profesionales de alta idoneidad asistidos por equipamiento de avanzadas ofrecen un servicio integral cubriendo áreas especiales como son la biología molecular, la citometría de flujo, la inmunoserología, la hematología y la microbiología, entre otras. Además, bajo el lema de “Más recursos. Más humanos” e impulsados por el progreso de la tecnología han incorporado equipamiento de última generación, con el fin de avanzar firme-mente en su objetivo: que el hombre haga lo que la máquina no puede, que es pensar en el paciente.
Dr. Gerardo De Blas
Director de contenidos
Revista Bioanálisis
Resumen:
¿Cómo y en qué año se fundó el Laboratorio Turner?
Si bien a principios de 1960, habíamos comenzado a trabajar como Bioquímicos independientes en un pequeño laboratorio en nuestra casa del Barrio Arroyito en Rosario, el primer laboratorio con instalaciones propias lo abrimos el 17 de abril de 1964. La oportunidad surgió a partir de una experiencia previa en Endocrinología y como una respuesta a la solicitud de un grupo de Endocrinólogos de Rosario de armar un laboratorio de análisis clínicos de dicha especialidad. Lo instalamos en el edificio donde funcionaba la Clínica de Glándulas Endocrinas, en calle Córdoba 1764.
¿Cómo es ser colegas, socios, compañeros de trabajo y matrimonio desempeñándose toda una vida en el mismo sitio?
Bien… la clave… diremos juntos lo que cada uno ha sentido, conservando nuestras diferencias, pero siguiendo el mismo rumbo. Pasión por lo que hacíamos, tolerancia para esperarnos y capacidad de adaptación para lo que se nos proponía. Inconscientemente cada uno jugó un rol distinto. Diego fue docente por sobre todas las funciones y como tal, siempre estudiando y siendo alumno a la vez, respetado por Elda, quien constantemente solicitaba aportes actualizados para llevar adelante su labor bioquímica. Diego devolvía dicho respeto estimulando a su colega-compañera a no abandonar la lucha. Constancia y paciencia forjaron lazos fuertes en nuestra sociedad matrimonial y profesional. Sin duda, vivir disfrutando lo que juntos construíamos.
¿Cómo han vivido los avances de la bioquímica y la tecnología aplicada a la profesión en toda una vida de ejercicio profesional? ¿Cómo fue la evolución del Laboratorio con el paso de los años?
Los hemos vivido naturalmente y acompañados. Fuimos en busca de ellos. Ya en nuestros comienzos, en el laboratorio de la clínica de calle Córdoba, participamos de un grupo de médicos que había tomado contacto con renombrados profesionales. Diego pudo viajar a Lima en un grupo en el cual se encontraba el Dr. Bernardo Houssay, lo cual lo marcó en su relación con los avances. Desde allí vislumbramos que nuestro proyecto necesitaba del estudio continuo. Diego siguió buscando aprender, integrándose al Club de Esteroides en Bs. As., y Elda siguió buscando vender…, distintos roles en nuestra sociedad. Cada regreso de Diego de sus viajes al club nos traía un avance científico/tecnológico y por ende el deseo de aprenderlo para alcanzarlo. Luego vinieron los años con Lucho y llegó GEFER, el Chiche y su empuje. Siempre fuimos acompañados por los proveedores, de aquí y de allá, y siempre nos esforzamos por retribuir su confianza.