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Revista Nº 9 Mayo - Junio 2006

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Investigacin


La fosforilacin mediada por Protena kinasa C de dos regiones polibsicas de la sinaptotagmina VI regula su funcin en la exocitosis acrosomal

Autor: Roggero CM, Tomes CN, De Blas GA, Castillo J, Michaut MA, Fukuda M, Mayorga LS Laboratorio de Biologa Celular y Molecular, Instituto de Histologa y Embriologa (IHEM-CONICET), Facultad de Ciencias Mdicas, Universidad Nacional de Cuyo, Casilla de Cor

Hemos previamente publicado que la sinaptotagmina VI est presente en clulas espermticas humanas y que la protena recombinante que contiene los dominios C2A y C2B revoca la exocitosis acrosomal en espermatozoides permeabilizados. En este informe demostramos que cada dominio individual C2 bloquea la exocitosis acrosomal. El efecto inhibitorio se revierte por la fosforilacin de los dominios con PKCbeta II purificado. Encontramos por mutagnesis dirigida que Thr418 y/o Thr419 en la regin polibsica (KKKTTIK) del dominio C2B, una regin clave para la funcin de las sinaptotagminas, son los blancos de la PKC que regula su efecto inhibitorio sobre la exocitosis acrosomal. De manera similar, hemos demostrado que Thr284 en la regin polibsica del C2A (KCKLQTR) es el blanco para las fosforilacin mediada por PKC de este dominio. Un anticuerpo que se une especficamente a la regin polibsica fosforilada del dominio C2B reconoci sinaptotagmina fosforilada endgena en la regin acrosomal del espermatozoide. El anticuerpo fue inhibitorio nicamente en los estados tempranos de la exocitosis en el ensayo de la reaccin acrosomal espermtica y el inmunomarcado disminuy con la estimulacin espermtica, indicando que la protena es desfosforilada durante la exocitosis acrosomal.
Nuestros resultados indican que la exocitosis acrosomal est regulada por la fosforilacin mediada por PKC de treoninas conservadas en la regin polibsica de la sinaptotagmina VI.


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