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Revista Nº 9 Mayo - Junio 2006

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Diagnstico Bioqumico


Onco-Hematologa: Contribucin de la PCR en Tiempo Real

Autor: Dra. Marina I. Gutirrez Laboratorio Dr. Stamboulian. Divisin Biologa Molecular. Buenos Aires

PCR en tiempo real

La PCR (reaccin en cadena de la polimerasa) en tiempo real es un mtodo altamente sensible que requiere muestras muy pequeas, es decir que con muy poco material biolgico se pueden obtener resultados y muy rpidamente (1 hora). Como la PCR convencional, puede ser utilizada para determinaciones cualitativas pero, a diferencia de aquella, es tambin una herramienta cuantitativa (Q-PCR). Es justamente esta propiedad la que ha convertido a la PCR en tiempo real en la vedette de los laboratorios de Biologa Molecular de ltima generacin.
La PCR en tiempo real permite amplificar y simultneamente detectar el producto amplificado, en cada ciclo de amplificacin, ya que el amplicon es revelado midiendo la seal fluorescente a medida que se va produciendo. La intensidad de la fluorescencia en cada ciclo es directamente proporcional a la cantidad de producto de PCR en cada ciclo y esto depende de la cantidad inicial de templado. Por esto, la cuantificacin est facilitada, a diferencia de la PCR convencional donde se evala el resultado final. La PCR en tiempo real tambin permite que varias reacciones se realicen en un mismo tubo (multiplex). Como no requiere manipulacin post-PCR, se pueden reducir significativamente los riesgos de contaminacin. Este aspecto es an ms notorio si tenemos en cuenta que la alta sensibilidad de la PCR en tiempo real permite reemplazar PCRs nested.
Esta nueva herramienta de la Biologa Molecular es aplicable a todas las reas de la Medicina: enfermedades infecciosas, hematologa, oncologa, transplante de rganos, gentica, farmacogentica, etc. Se han desarrollado kits, pero todava son limitados y la mayora de ellos no permite una cuantificacin absoluta, sino una cuantificacin relativa (diferencia o ndice con respecto a una referencia o calibrador). Estos datos son suficientes para cierto tipo de estudios, pero no para otros donde una cuantificacin absoluta es ms informativa. Por eso, los mtodos caseros (desarrollados artesanalmente en el propio laboratorio) siguen siendo muy usados en las PCR en tiempo real. Sin embargo, deben utilizarse en forma apropiada conociendo sus limitaciones. La utilizacin de standards (comerciales o caseros) y un estricto control de la variabilidad entre corridas y de la reproducibilidad del standard son indispensables.
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