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Revista Nº 62 Marzo-Abril 2015

Sumario Editorial Diagnstico Bioqumico Agenda Arte Bioagenda

Diagnstico Bioqumico


Metodologías innovadoras en el diagnóstico molecular del Síndrome de Fragilidad del cromosoma X

Autor: Lic. Ignacio J. Chiesa Dra. María Silvia Pérez

El síndrome del cromosoma X frágil (FXS, Fragile X Syndrome), es la causa más frecuente de retraso mental hereditario (1), que afecta aproximadamente a 1 de 4000 hombres y 1 entre 5000 y 8000 mujeres.Este desorden es usualmente causado por la ausencia de la proteína FMR1. Se hereda como un trastorno mendeliano de tipo dominante ligado al cromosoma X. Presenta además, una penetrancia incompleta (80% para varones y 30% para las mujeres).

FXS es causado por la expansión de la secuencia repetitiva del triplete citosina-guanina-guanina (CGG) en la región 5´ no codificante del gen FMR1 (retraso mental X frágil 1) (2).Los pacientes con FXS poseen un número mayor a 200 repeticiones del triplete. Como resultado de la expansión, la secuencia repetitiva CGG y la región cercana al promotor del gen FMR1 sufre una metilación inhibiendo la transcripción de la proteína y causando la ausencia de la misma. La distribución subcelular de la proteína FMR1 es en gran parte citoplasmática y su expresión es generalizada pero abundante en neuronas, particularmente en las dendritas. La función fisiológica de la proteína FMR1 aún no está bien definida, sin embargo, distintas investigaciones realizadas sugieren que cumple un rol en el transporte y/o traducción de los ARNm(3).

La evaluación del riesgo y la interpretación clínica del FXS y de los trastornos relacionados se determinan por el número de repeticiones CGG y por el estado de metilación del gen. Según el número de re-peticiones CGG se distinguen cuatro tipos de alelos: alelos no afectados o normales, alelos intermedios (también llamados “zona gris”), alelos con premutación y alelos con mutación completa (Figura 1).


















En el caso de los alelos con pre-mutación, el riesgo de expansión a una mutación completa aumenta con el tamaño. Por encima de 100 repeticiones, existe un riesgo sistemático de expansión en la siguiente generación.

Muchos alelos del FMR1 contie-nen secuencias AGG que se intercalan entre las repeticiones CGG. Se piensa que las “interrupciones” AGG confieren estabilidad al ADN y reducen el riesgo de expansión en la siguiente generación (6).

Dentro de los individuos con mutación completa se han encontrado algunos con mosaicismos de repeticiones de diferentes tamaños en distintas poblaciones celulares. El mosaicismo se observa como un chorreado en el rango de mutación completa en un Southern blot. También se han reportado casos de mosaicismo de tamaño con alelos premutados y con mutación completa. El rol del mosaicismo en la clínica del paciente aún no está claro (7).

Actualmente, la mayoría de las pruebas de diagnóstico molecular deFXSse basan en la PCR y posterior separación por tamaño mediante electroforesis capilar (CE), electroforesis en gel de agarosa (AGE), o gel de poliacrilamida (PAGE) para detección de hasta 100-150 repeticiones CGG. El análisis de transferencia (southern blot) se utiliza para caracterizar muestras con un número demasiado grande de repeticiones CGG como para amplificarlas por PCR, y para determinar el estado de metilación del gen.

Realizar un southern blot es costoso, se necesita tiempo, mano de obra in-














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tensiva y requiere grandes cantidades de ADN genómico (gDNA), lo cual dificulta el análisis de una gran cantidad de muestras o de estudios poblacionales.La técnica PCR tiene el potencial para hacer frente a cada una de estas limitaciones, sin embargo, el carácter de la secuencia repetitiva altamente rica en GC de la región del gen ha dificultado históricamente la amplificación. Se han realizado innovaciones a la PCR, como el uso de adyuvantes osmolíticos, nucleótidos modificados, y condiciones específicas de ciclado que han mejorado la detección de hasta aproximadamente 300-500 repe-ticiones CGG, sin embargo aún esta técnica podría no detectar la mayoría de los alelos que tengan una mutación completa. Es importante destacar que el análisis por PCR de las muestras premutadas y con mutación completa de pacientes femeninos es incluso más problemática porque ocurre una amplificación preferencial de los alelos más pequeños(8). En consecuencia, más del 20% de las muestras de mujeres que son homocigotas deben estudiarse por southern blot para resolver la potencial ambigüedad de un alelo expandido no amplificado.
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