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Revista Nº 60 Noviembre - Diciembre 2014

Sumario Editorial Diagnstico Bioqumico Investigacin Agenda Arte Bioagenda

Diagnstico Bioqumico


Deteccin de Virus Papiloma Humano por Tecnologa DNA Flow

Autor: Bioq. Raquel Cino BioSystems S.A. Email: cinoraq@biosystems.com.ar Web: www.biosystems.com.ar

La infeccin persistente por HPV (Virus Papiloma Humano) es el agente causal de lesiones epiteliales escamosas benignas y malignas que pueden llevar a cncer cervical.
HPV 16 y 18 son responsables del 70% de los casos de este tipo de cncer en el mundo.

Con la implementacin de vacunas profilcticas contra HPV 16 y 18 (Cervarix-GlaxoSmithKline) o HPV 6, 11, 16 y 18 (Gardasil-Sanofi Pasteur MSD) se espera una reduccin importante en la incidencia de cncer cervical. La proteccin efectiva contra HPV 16 y 18 y posible proteccin cruzada contra otros genotipos modificar la prevalencia de genotipos de HPV en las poblaciones vacunadas.

Sin embargo el test para HPV ser requerido para el seguimiento de lesiones causadas por genotipos no includos en las vacunas y para estudiar su desarrollo en las lesiones cervicales.

La genotipificacin de HPV tam-bin ser necesaria para un adecuado screening de poblaciones no vacunadas y estudios epidemiolgicos.

Los tipos de muestras utilizados para llevar a cabo la deteccin de HPV son hisopados cervicales, citologas lquidas y biopsias de tejidos includos en parafina (FFPE).

La deteccin de HPV en muestras FFPE no se lleva a cabo en forma eficiente debido a la fragmentacin parcial del DNA en los tejidos embebidos, resultando en un porcentaje ms bajo de deteccin y menos-cabando la identificacin de infecciones mltiples.

El kit HPV DIRECT FLOW CHIP (MASTER DIAGNOSTICA-ESPAA), fue lanzado al mercado como un nuevo sistema para genotipado rpido y sensible de HPV:
El sistema permite la deteccin del virus HPV y el genotipado de 36 tipos de HPV de alto y bajo riesgo. Se basa en la ampli-ficacin de un fragmento de la regin vrica L1 mediante PCR, seguido de hibridacin en membrana con sondas de DNA especificas por dot blot reverso de los productos amplificados mediante la tecnologa DNA-Flow:Permite una unin rpida entre el producto de PCR y su sonda especfica en un ambiente tridimensional poroso en contras-te con la hibridacin en superficie conven-cional.

Los amplicones biotinilados gene-rados tras la PCR se hibridan en membranas que contienen sondas especficas para el genotipado de HPV, as como una sonda genrica universal para screening de HPV y sondas de control de amplificacin e hibridacin.

Una vez producida la unin entre los amplicones especficos y sus sondas correspondientes la seal se visualiza mediante una reaccin inmunoenzimtica colorimtrica con Estreptavidina-FAL y un cromgeno que genera precipitados insolubles en la membrana en aquellas posiciones en las que ha habido hibridacin.

La formulacin especfica de la mix de PCR y la polimerasa del kit permite que la PCR sea llevada a cabo dentro de los 60 minutos. Esto incluye la amplificacin de un fragmento de 268 bp en el gen humano de la B-globina (Control Interno) y un fragmento de 150 bp de la regin L1 del HPV usando los primers consenso GP5+/GP6+.
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