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Revista Nº 51 Mayo - Junio 2013

Sumario Editorial Diagnstico Bioqumico Gacetilla Agenda Arte Bioagenda

Diagnstico Bioqumico


Desarrollo y validacin de una PCR mltiple para el diagnstico de Bordetella spp.

Autor: Luis Alfredo Pianciola 1a, Melina Leonor Mazzeo 2a, Daro Flores 2b, Daniela Flavia Hozbor 3b. 1 Magister en Microbiologa Molecular 2 Bioqumico 3 Doctora en Bioqumica a Laboratorio Central. Subsecretara de Salud de Neuqun. Gregorio

El objetivo del trabajo consisti en disear y validar una PCR en formato convencional que permita confirmar la presencia o ausencia de Bordetella pertussis y detectar otras especies del gnero, como Bordetella parapertussis y Bordetella bronchiseptica, que pudieran estar involucradas en el cuadro clnico de coqueluche. A tal fin se dise una reaccin en cadena de la polimerasa (PCR) mltiple que amplifica una secuencia del promotor del gen de Toxina Pertussis y otra del gen de la Toxina Adenilato Ciclasa-Hemolisina. Se valid la metodologa siguiendo esquemas publicados anteriormente. Se optimizaron las condiciones de la PCR. Se valid la metodologa obtenindose un lmite de deteccin para ambas secuencias de 0,5 bacterias por reaccin. Se valid, adems, la especificidad y robustez de la tcnica. Se presenta una nueva herramienta diag-nstica optimizada y validada, que permite detectar la presencia de las especies de Bordetella ms frecuentemente involu-cradas en el cuadro clnico de coqueluche. Su uso combinado con alguna de las PCR habituales en diagnstico, como la PCR IS481, permite aumentar la sensibilidad del diagnstico de esta enfermedad, la especificidad del mismo discriminando los resultados falsos positivos/negativos y aumentar el conocimiento sobre los agentes etiolgicos implicados en esta patologa.
Palabras clave: Bordetella pertussis * Bordetella parapertussis * Bordetella bronchiseptica * reaccin en cadena de la polimerasa.

Introduccin

Pertussis o coqueluche es una infeccin respiratoria aguda, altamente contagiosa y particularmente grave en menores de un ao. Se estima que esta enfermedad inmunoprevenible, luego de ms de 60 aos de vacunacin, an produce en el mundo 30 millones de casos por ao con ms de 300 000 muertes (1) (2). El principal agente etiolgico de esta enfermedad es una bacteria gran negativa perteneciente al gnero Bordetella denominada Bordetella pertussis. Otra especie del gnero, Bordetella paraper-tussis, tambin causa la enfermedad, aunque con menor frecuencia y general-mente presenta cuadros ms leves (3). Bordetella bronchiseptica es primaria-mente un patgeno animal, pero tambin puede causar infecciones en seres humanos, generalmente en pacientes inmunocomprometidos (4).

Recientemente, esta especie ha sido asociada a cuadros similares a pertussis, aunque generalmente con evolucin clnica menos severa (5). Bordetella holmesii, la ltima especie descripta asociada a infecciones respiratorias, se ha encontrado en sangre de adultos jvenes y ocasionalmente en el tracto respiratorio. Ha sido relacionada tambin a cuadros similares a pertussis aunque su impacto epidemiolgico en esta patologa an no se conoce (6) (7).
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