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Revista Nº 47 Setiembre - Octubre 2012

Sumario Editorial Diagnstico Bioqumico Investigacin Gacetilla Bioqumica Empresarial Agenda Arte Bioagenda

Diagnstico Bioqumico


Bases bioqumicas de los mtodos para hemoglobina glicosilada

Autor: Lic. Irene Aranda BG ANALIZADORES S.A. E-mail: irenearanda@bganalizadores.com.ar



Los valores de Hb Glicosilada son utilizados para evaluar por largos perodos la glucosa en el control de la diabetes, especialmente en diabticos insulino-dependientes, pues los niveles de glucosa en sangre y en orina poseen una variacin diaria significativa.

La hemoglobina est compuesta por varias fracciones. La Hb1 es la fraccin de hemoglobina glicosilada total o general, la Hb0 la no glicosilada y la HbA1c es la glicosilada particular. Existen varias tcnicas utilizadas para medir la fraccin de la hemoglobina y los diferentes mtodos analticos detectan diversas fracciones de est.

En una electroforesis en resinas de intercambio inico, la hemoglobina glicosilada (Hb1) migra ms rpido que la hemoglobina no glicosilada (Hb0), permitiendo as separar las dos fracciones de la hemoglobina.

Cromatografa de columna

Se ha ubicado como una prueba obsoleta ya que presenta problemas de calibracin, baja reproducibilidad y en medicin de la HbA1c. Adems es dependiente del pH y la temperatura a la cual se realiza la prueba. Al principio se utilizaba este mtodo por ser una prueba de fcil acceso, pero hoy en da solo la utilizan laboratorios clnicos de bajo volumen de muestras.

Cromatografa liquida de alta eficiencia HPLC

Utilizada para separar los compo-nentes de una mezcla basndose en diferentes tipos de interacciones qumicas entre las sustancias analizadas y la columna cromatogrfica.

Consiste en hacer pasar a la hemoglobina glicosilada por la columna cromatogrfica (de vidrio) a travs de la fase estacionaria, mediante el bombeo de lquido a alta presin a travs de la columna. La muestra a analizar es introducida en pequeas cantidades y sus componentes se retrasan diferencialmente dependiendo de las interacciones qumicas o fsicas con la fase estacionaria a medida que adelantan por la columna. Su objetivo es aumentar la eficiencia en las separaciones, el tamao de las partculas de la fase fija va disminuyendo hasta llegar al tamao de un micrn, generando por ende la necesidad de utilizar altas presiones para lograr que fluya la fase mvil.

Si bien es un mtodo de referencia, es tcnicamente complejo, consume ms tiempo y es de mayor costo, por lo que no se usa como rutina en la prctica clnica.

Mtodos inmunolgicos

Los mtodos inmunolgicos utilizan anticuerpos contra una secuencia de aminocidos que varan de 3 a 8 de la fraccin N-terminal de la hemoglobina glicosilada. Tienen como ventaja el que son especficos contra la HbA1c y pueden ser incorporados a los autoanalizadores de qumica clnica ya sea por mtodos de inmu-noturbidimetra, como se esquematiza.

En la determinacin por esta tcnica se cuantifican tanto la hemoglobina total como la HbA1c. Para la cuantificacin de la hemoglobina total se hemoliza la muestra y la solucin se somete a un bfer alcalino de un detergente no inico, convirtiendo la hemoglobina en hematina y estabilizando la molcula. La hematina torna la solucin de un color verde, que es cuantificado a una longitud de onda de 604 nanmetros (nm). Para la cuantificacin de la HbA1c igualmente se debe hemolizar la muestra y se procede con dos pasos elementales:
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