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Revista Nº 44 Marzo - Abril 2012

Sumario Editorial Diagnstico Bioqumico Investigacin Agenda Arte Bioagenda

Diagnstico Bioqumico


Estudio de regiones de ADN por MLPA para screening de enfermedades hereditarias

Autor: Tecnolab s.a. Area Patologa E-mail: patologa@tecnolab.com.ar



Qu es MLPA (Multiplex Ligation-dependent Probe Amplification)?

MLPA es una tcnica de biologa molecular, (Multiplex PCR), que permite que en una misma reaccin se pueda detectar copias anormales de hasta 50 secuencias genmicas diferentes de ARN o ADN. La tcnica de MLPA se basa en una primera reaccin de unin-ligacin de sondas con la zona homloga de inters; slo las sondas que hayan hibridado podrn ser ligadas, y posteriormente amplificadas por PCR. Mediante un anlisis de fragmentos y aprovechando la diferencia de tamao de cada una de las sondas, se podrn identificar aberraciones en el nmero de copias genmicas.

La tcnica MLPA posee muchas aplicaciones, incluyendo la deteccin de mutaciones, el anlisis de perfiles de metilacin, la cuantificacin relativa de ARNm, la caracterizacin cromosmica de lneas celulares y muestras de tejido, la deteccin de variaciones en el nmero de copias del genoma, la deteccin de duplicaciones y deleciones en genes relacionados con la predisposicin al cncer humano y determinacin de aneuploidias. Asimismo, MLPA posee un gran potencial para el diagnstico prenatal

Ventajas de MLPA para el estudio gentico

MLPA ofrece mltiples ventajas respecto a otras tcnicas que existen en el mercado para la deteccin de nmeros de copias genmicas. Los mtodos de cromatografa lquida de alta eficacia desnaturalizante (DHPLC) y secuenciacin poseen una buena especificidad para la deteccin de polimorfismo de un solo nucletido (SNP), pero fallan en cuanto a la deteccin de cambios en el nmero de copias. Por el otro lado, la tcnica de Southern blot permite identificar y diagnosticar grandes aberraciones pero no siempre detecta pequeas deleciones y adems implica una elevada laboriosidad.

Aunque las deleciones y amplifi-caciones pueden ser detectadas por PCR, que identifican el exn, el intrn o secuencia reguladora en el que se encuentra la mutacin, este tipo de estudio directo solo se puede realizar cuando se conoce el sitio exacto de la mutacin. Existen enfer-medades genticas que no estn causadas por mutaciones concretas, como ocurre en el gen regulador de la conductancia transmembrana de la fibrosis qustica (CTFR), los genes de cncer de mama BRCA1 y BRCA2, y el gen de retinoblastoma (RB1), lo que hace necesario un anlisis exhaustivo del gen o genes afectados. La tcnica de MLPA presenta la gran ventaja de que existen numerosos genes o regiones determinadas del ADN que se estudian simultneamente en una sola determinacin. Al comparar MLPA con la tcnica de Hibridacin in situ fluorescente (FISH), MLPA no solo presenta la conveniencia de ser una tcnica mltiplex, sino tambin permite identificar aberraciones que resultan demasiado pequeas (50-70 nt) para ser detectadas por hibridacin in situ. Finalmente, al cotejarla con la hibridacin genmica comparada (CGH array), MLPA es una tcnica de bajo costo, requiere nicamente de un termociclador y un equipo de electroforesis capilar, y es sencilla. Asimismo, MLPA ofrece un alto rendimiento en el procesamiento, hasta 96 muestras pueden ser manejadas simultneamente, obtenindose resultados dentro de las 24 hs. Motivos por los cuales MLPA debe considerarse como la primera alternativa en el estudio gentico de enfermedades que van desde las clsicas (Duchene, sndrome DiGeorge, SMA), a las ms raras (pancreatitis hereditaria, deficiencia de antitrombina, sndrome de Birt-Hogg-Dube).
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