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Revista Nº 35 Setiembre - Octubre 2010

Sumario Editorial Diagnstico Bioqumico Bioqumica Empresarial Investigacin Entrevista Gacetilla Agenda Arte Bioagenda

Diagnstico Bioqumico


Mtodo Automatizado para Tipificacin de Componentes Monoclonales por Electroforesis Capilar (Immunotyping)

Autor: Raquel Osatinsky (Jefa del Dpto. de Protenas de MANLAB), Vanesa P. Chavez ( Bioqumica), Nieves Sainz (Estudiante de Bioqumica de la UAJFK). E-mail: raquel.osatinsky@genesis-manlab.com.ar









Introduccin

La electroforesis capilar es un mtodo de separacin electrofortica en medio lquido, totalmente automatizado (EC). La inmunosustraccin (IS) o inmuno-tipificacin (IT), fue desarrollada en 1977 por Aguzzi y col. para identificar los compo-nentes monoclonales (CM) y fue realizada sobre soporte de agarosa en forma manual empleando los mtodos electroforticos de la poca.

Su aplicacin a la identificacin de CM se realizaba nicamente en laboratorios especializados dada la complejidad para la preparacin de las placas de agarosa. Razn por cual no se difundi su uso en los laboratorios bioqumico clnicos.

La inmunofijacin en agarosa (IF) para la tipificacin de CM no es aplicable a la EC. En 1998 Bienvenu y col. aplican por primera vez la IS en la EC y a partir del 2000, se la aplica a los equipos totalmente automatizados de EC (Capillarys 2 Sebia), para la identificacin y tipificacin de cadenas pesadas y livianas de la inmuno-globulina intacta de los CM, denominando al mtodo Immunotyping.

Mtodo

Es una tcnica de separacin electrocintica realizada en un capilar de dimetro interno inferior a 100 m, lleno de un tampn compuesto por electrolitos. La separacin se realiza en medio alcalino (pH 9,9). Se la considera una tecnologa inter-media entre el soporte de zona y la cromatografa lquida. El sistema Capillarys 2 usa el principio de la electroforesis en solucin libre, que es la forma ms corrriente de la EC.

Separa las molculas cargadas en funcin de su movilidad electrofortica propia en un tampn de pH dado, segn el pH del electrolito, y de un flujo electro-endosmtico ms o menos importante.

La inmunotipificacin se realiza empleando antisueros monoespecficos anticadenas pesadas (IgG, IgA, e IgM) y anticadenas livianas ( kappa y lambda) de las inmunoglobulinas.

El Capillarys 2 realiza ocho electro-foresis de suero en forma simultnea porque tiene esa cantidad de capilares, las muestras son aspiradas por presin negativa en el nodo y su separacin se realiza aplicando una diferencia de potencial de 7.800 voltios en los extremos de cada capilar. La deteccin directa de las protenas se realiza en el extremo catdico, la lectura se efecta a 200 nm y el tiempo de corrida es de cuatro minutos. Los capilares se (...)
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