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Revista Nº 31 Enero - Febrero 2010

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Diagnstico Bioqumico


Ensayos de Genotipificacin de Resistencia a Anti-retrovirales

Autor: Dr. Daniel Pirola. Jefe rea Infectologa Molecular. Gnesis-MANLAB. E-mail: docencia@genesis-manlab.com.ar



Numerosas drogas antivirales se encuentran aprobadas para el tratamiento de la infeccin por el virus de la inmunodeficiencia humana (HIV-1) (Tabla 1). Los grupos ms antiguos son: inhibido-res de la transcriptasa reversa, nucleotdi-cos/nucleosdicos (NRTI), inhibidores de la proteasa e inhibidores de la transcriptasa reversa no nucleosdicos (NNRTI) e inihi-bidores de la proteasa (PI). Recientemente, se ha descripto un nuevo grupo de drogas que inhiben a la enzima integrasa. En los ltimos 15 aos la combinacin de tres o ms drogas de al menos dos clases de antivirales ha logrado prolongar la supresin de la multiplicacin viral y permitir la reconstitucin del sistema inmunolgico. Adicionalmente a las dificultades del tratamiento caracterizado por los efectos adversos, costo, adherencia, la inhibicin incompleta de la multiplicacin viral es causa y consecuencia de la aparicin de resistencia al tratamiento antiviral. Estas variantes virales (cuasiespecies) resistentes se generan a lo largo del tratamiento por la elevada tasa de mutacin que posee el virus.
Los ensayos genotpicos de resistencia son comnmente usados desde hace varios aos y estn ampliamente evaluados en la bibliografa para detectar a los aislamientos de HIV-1 resistentes. Representan una de las primeras aplicaciones clnicas de la secuenciacin de genomas virales en el campo de las enfermedades infecciosas. Numerosos estudios demuestran que la presencia de mutaciones de resistencia es un factor predictivo independiente en la efectividad de un tratamiento antiviral.

La resistencia puede ser trans-mitida de individuo a individuo. Se conoce que en muchas regiones un porcentaje alto de nuevas infecciones estn asociadas a la transmisin de virus resistentes a una o ms drogas antivirales.

La estrategia ms clsica para investigar la resistencia es la deteccin fenotpica de la resistencia basada en pruebas biolgicas denominadas antivirogramas, en analoga a las pruebas de susceptibilidad a antibiticos que se emplea para las bacterias. Los ensayos fenotpicos incluyen el cultivo del virus en presencia de diluciones del antiviral. Los resultados se expresan habitualmente como IC50 o IC90 (concentracin inhibitoria 50 o 90 % respectivamente). Esta metodologa es laboriosa y requiere adaptar la cepa del paciente a las condiciones de cultivo in vitro. Con el fin de mejorar este ensayo se han desarrollado estrategias de clonado parcial de genes virales de la cepa en virus adaptados a cultivo.

Los ensayos para genotificar la resistencia estn basados en la secuen-ciacin del genoma del virus en las regiones especficas de los genes de la RT (transcriptasa reversa) (codones 40 a 247) y Pr (Proteasa) (codones 1 a 99) y en identificar las mutaciones frecuentemente observadas en las cepas resistentes, las cuales se describen en la (...)
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