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Revista Nº 27 Mayo - Junio 2009

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Diagnstico Bioqumico


Mejorando el Diagnstico de Alergia: Evolucin de los Ensayos in Vitro para Alergenos Especficos

Autor: Bioq. Gabriela Feldhaus; gabriela.feldhaus@siemens.com; www.siemens.com/diagnostics; Tel.: (54 11) 4738 7433; Siemens Healthcare Diagnostics S.A.







En los ltimos tiempos, la incidencia de nuevos casos de alergia ha aumentado a niveles alarmantes. De hecho, es considerada una preocupacin de salud pblica significante, debido a que esta enfermedad afecta la calidad de vida, disminuyendo la produccin laboral, influyendo negativamente en la performance escolar y aumentando los costos en salud.

Muchas veces, la alergia es confundida con resfros comunes, debido a la similitud de los sntomas. De todas maneras, cuando estos sntomas persisten, probablemente, se trate de alergia y sta deba ser diagnosticada y tratada.

El diagnstico precoz y un correcto tratamiento mejoran, notablemente, la calidad de vida del paciente.


Qu es la alergia?

Alergia es una respuesta inmune mediada por anticuerpos IgE a una sustancia (alergeno) que, normalmente, no es peligrosa pero que es reconocida por el organismo como extraa. Algunos alergenos comunes son polen, animales, alimentos, polvo, insectos, metales (sobretodo nquel) y drogas.

En la cascada alrgica, cuando un Linfocito B de nuestro organismo reconoce a un alergeno, produce anticuerpos IgE. Estos anticuerpos circulan por el torrente sanguneo; algunos interactan con la superficie de mastocitos y basfilos presentes en los conductos nasales, pulmones, piel y tracto digestivo. Cuando un alergeno es reconocido nuevamente, se une a los anticuerpos IgE en la superficie de estas clulas, produciendo la liberacin de mltiples mediadores inflamatorios, incluyendo histamina. Estos mediadores inflamatorios son los que causan los sntomas de la alergia, que varan de leves a severos.

La marcha de la alergia

La marcha de la alergia describe la progresin de la enfermedad en individuos atpicos (personas con predisposicin gentica). Esta progresin, frecuentemente, comienza con una dermatitis atpica, resfros recurrentes y trastornos digestivos, durante los primeros aos de vida. A la edad de 3 a 7 aos, pueden comenzar los trastornos del tracto respiratorio superior, como rinitis y sinusitis, con otitis y conjuntivitis como las complicaciones ms frecuentes. La progresin de la alergia termina con asma, enfermedad que, generalmente, se manifiesta entre los 7 y 15 aos.

Las estadsticas establecen que la incidencia de asma en nios hasta 4 aos aument 160% entre los aos 1980 a 1998. Adems, Mller y colaboradores, demostraron en el ao 2002, que la identificacin temprana de la enfermedad puede detener la progresin y su morbilidad.

El camino hacia el diagnstico

A pesar de que la alergia puede desencadenarse en cualquier momento de la vida (incluso en adultos) es, generalmente, catalogada como una enfermedad comn y crnica de la infancia y los profesionales de atencin primaria o pediatras son los primeros en evaluar su presencia en los nios.

Organizaciones de Salud establecen que los profesionales de atencin primaria deben estar capacitados para una primera evaluacin del paciente (que podra incluir tests diagnsticos) para determinar la necesidad de su derivacin a un especialista. Generalmente, son estos profesionales los que inician el proceso diagnstico para diferenciar enfermedades alrgicas de las no alrgicas.

Los tests in vitro constituyen una herramienta conveniente, reproducible, y confiable para este proceso. No requiere entrenamiento especial del profesional involucrado para su interpretacin y se correlacionan con los resultados obtenidos a travs de los tests cutneos.

Las guas establecidas por las Asociaciones Europeas y Americanas de alergia (AAAAI y EAACI), recomiendan que el diagnstico de alergia en nios debiera ocurrir lo ms precozmente posible y la identificacin de los alergenos involucrados debera ser posible. Las guas diagnsticas involucran tres elementos fundamentales:
la historia clnica del paciente;
signos clnicos y sntomas de la enfermedad
tests diagnsticos: in Vivo (test cutneos) y/o tests in Vitro (laboratorio)


Mejoras en tests diagnsticos

Tradicionalmente, los tests diagnsticos in Vivo (tests cutneos) son la alternativa clnica preferida por los alergistas para confirmar el diagnstico de alergia y la identificacin de alergenos especficos. Estos mtodos son confiables en manos de alergistas entrenados, pero en algunos tipos de alergia como al man o veneno de insectos, entre otros, se pueden desencadenar reacciones anafilcticas y llevar al paciente a la muerte. Adems, no deja de ser un mtodo invasivo y peligroso, sobre todo en nios.

Los tests in Vitro, por el contrario, proporcionan informacin significativa, objetiva y relevante para el diagnstico de alergias, sin poner en riesgo la vida del paciente.

Muchos profesionales an no estn familiarizados con los avances de los tests in Vitro para detectar alergenos especficos. A lo largo de los aos, estos tests se han transformado en una herramienta sensible y precisa para generar resultados comparables con los obtenidos a travs de tests cutneos.

Exploremos la evolucin de los ensayos desde el desarrollo del RAST original en 1960, su evolucin a ensayos de segunda generacin con tecnologa fluorescente en los aos 1990 hasta la introduccin de ensayos de tercera generacin en el ao 2000:

Tests in vitro de primera generacin

Los primeros ensayos RAST medan cuentas radioactivas por segundo (CPS), emitidas por un anticuerpo marcado isotpicamente y los resultados eran semicuantitativos, ya que no exista disponibilidad de material para calibracin. Estos tests eran sumamente incmodos y lento; para ser incorporados en la rutina del laboratorio.

A pesar de que los primeros ensayos no tenan buena sensibilidad, con un 50% de falsos negativos, el inters en esta tecnologa continu. Ms adelante, se demostr que se podra mejorar la sensibilidad duplicando el volumen de muestra, incrementando los tiempos de incubacin (de 3 a 18hs) y aumentando los pasos de lavado.

De esta manera se mejor la sensibilidad, pero a expensas del tiempo y la conveniencia del laboratorio.

Tests in vitro de segunda generacin

La performance y practicidad de estos tests se vio mejorada durante los aos 90, a travs de nuevos ensayos cuantitativos semiautomticos. Diferentes tecnologas, como la fluorescencia, mejoraron significativamente la sensibilidad y el tiempo para el primer resultado. Se construyeron curvas de calibracin multipunto que posibilitaron las mediciones cuantitativas. A los ojos de los especialistas en alergia, estas mejoras justificaron la designacin de estos ensayos como de segunda generacin.

Debido a que pudo probarse la mejor sensibilidad y especificidad de los ensayos de segunda, por sobre los de primera generacin, investigadores y alergistas reconocieron el potencial de los ensayos in Vitro, los cuales proporcionaban informacin clnica til, especialmente por los resultados cuantitativos.

Tests in vitro de tercera generacin

Los ensayos e instrumentos de segunda generacin carecan de precisin a bajas concentraciones de IgE especfica (concentraciones por debajo de 0.35 kU/L). Debido a esta limitacin, los especialistas comenzaron a considerar valores por debajo de este valor de corte como negativos.

Los obstculos para investigar los efectos de bajas concentraciones de IgE especfica fueron salvados con la introduccin de ensayos y sistemas de tercera generacin. As surgi la
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