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Revista Nº 24 Noviembre - Diciembre 2008

Sumario Editorial Diagnstico Bioqumico Investigacin Entrevista Gacetilla Agenda Arte Bioagenda

Investigacin


Comparacin entre un medio cromognico y un medio de cultivo convencional para la realizacin de urocultivos en pacientes ambulatorios

Autor: Gariboglio Vzquez, Mara L.(1); Usandizaga, Graciela B. (1); Matzkin, Ricardo(1); Irigoyen, Bettina E.(1); Marques, Isabel (1); Merino, Luis A.(2) (1) Servicio de Microbiologa Clnica, Hospital Dr. Julio C. Perrando, 9 de Julio 1100, 3500 Resist



El objetivo del presente trabajo fue comparar el rendimiento del medio cromognico CPS-ID3 con el del medio CLDE utilizado rutinariamente para la siembra de orinas provenientes de pacientes ambulatorios del Hospital Julio C. Perrando de la ciudad de Resistencia, Chaco.
Entre mayo y agosto de 2007, se estudiaron 714 muestras de orina para urocultivo, las cuales fueron sembradas en agar CPS-ID3 y en agar CLDE; 169 (23,7%) muestras fueron positivas para un solo tipo bacteriano.
El medio cromognico permiti la identificacin por color, con un 100% de confiabilidad, de Escherichia coli y Proteus, reduciendo el tiempo de trabajo necesario para la identificacin de grmenes en un alto porcentaje de urocultivos.
El uso de la identificacin presuntiva de los principales uropatgenos de inters clnico en el medio de cultivo cromognico proporciona una respuesta diagnstica rpida, reduce la carga de trabajo y los costos, al evitar pruebas adicionales en la mayora de los aislamientos y puede ser considerada como una tcnica fiable en labo-ratorios asistenciales con un gran nmero de pacientes diarios.

Introduccin
El urocultivo es el anlisis ms realizado en laboratorios de bacteriologa clnica, ya que las infecciones del tracto urinario (ITU) son unas de las patologas ms comunes en el hombre. La metodologa tradicional empleada para el cultivo de muestras de orina requiere de al menos 48 hs. para identificar a un patgeno, y en algunos casos se necesitan pruebas adicionales que insumen varios das1.
Muchos pacientes con ITU necesitan un tratamiento de certeza, el cual se aplica luego de los resultados de las pruebas de susceptibilidad, y la posibilidad de conocer cul ser la droga apropiada depende de la identificacin y sensibilidad antimicrobiana de los microorganismos2.
Los medios cromognicos permiten realizar simultneamente el recuento, aislamiento e identificacin directa de las principales bacterias productoras de ITU, ya que estn compuestos por una mezcla de sustratos cromogni-cos de modo que, tras un perodo de incubacin y segn el sustrato que sea metabolizado, las colonias adquie-ren un color que resulta caracterstico para determinadas bacterias3.
El objetivo del presente trabajo fue comparar el rendimiento del medio cromognico CPS-ID3 con el del medio Cistina-Lactosa-Deficiente en Electrolitos (CLDE) utilizado rutinariamente para la siembra de orinas provenientes de pacientes ambulatorios de un Hospital General.

Materiales y mtodos
Se incluyeron en el presente estudio todas las orinas de pacientes ambulatorios con sospecha clnica de padecer una ITU y que presentaran los siguientes criterios: menos de 3 clulas epiteliales de descamacin por campo de 400X y de ms de 5 leucocitos por campo de 400X, o menos de 3 clulas epiteliales de descamacin por campo de 400X y de menos de 5 leucocitos por campo de 400X pero con bacteriuria.
Todas las muestras fueron mantenidas en el laboratorio a 4C por un mximo de 4 hs. hasta su procesamiento.
Previa homogenizacin por agitacin se inocularon con ansa calibrada 0,5 l de muestra de orina en agar CPS-ID3 y en agar CLDE.
Luego de una incubacin de los dos medios de cultivo durante 18 hs. a 35C se procedi a realizar el recuento de unidades formadoras de colonias por mililitro (UFC/ml) y la identificacin bioqumica de los aislamientos mediante pruebas clsicas en los medios convencionales y, segn las indicaciones del fabricante, en el medio cromognico.
Slo se incluyeron para la comparacin de resultados aquellos cultivos con menos de dos tipos de microorga-nismos, mientras que las muestras con dos o ms tipos de microorganismos fueron clasificadas como mezclas y excluidas.
Los datos fueron registrados y analizados mediante el programa Microsoft Excel.

Resultados
Entre mayo y agosto de 2007, se estudiaron 714 muestras de orina para urocultivo, de las cuales 169 (23,7%) resultaron positivas para un solo tipo bacteriano. De ellas se consideraron slo 127 para el presente estudio por haber arrojado recuentos mayores a 102 UFC/ml.
Los datos obtenidos con relacin al recuento de colonias en ambos medios estudiados aparecen en la tabla 1.
En la tabla 2 y en la figura 1 se presentan los colores de las colonias obtenidos con cada especie bacteriana en el medio CPS-ID3.
En total fueron identificadas 11 especies diferentes de uropatgenos, siendo Escherichia coli la ms frecuente entre ellas.
Las coloraciones caractersticas para la identificacin directa en los medios cromognicos fueron observadas en todas las muestras de Proteus mirabilis y Enterococcus spp. Sin embargo, se hallaron 10/68 aislamientos de Escherichia coli que presentaban colonias incoloras imposibilitando su identificacin cromognica inicial; en esos casos se debi recurrir a pruebas bioqumicas para identificarlos.

Discusin
Las ITU de pacientes ambulatorios son generalmente causadas por contadas especies bacterianas, siendo E. coli la ms comn de todas4.
El medio Cistina-Lactosa-Deficiente en Electrolitos (CLDE), descripto inicialmente por Sandys y luego modifica-do por Mackey y Sandys, es un medio no selectivo capaz de permitir el crecimiento de la mayora de los patgenos urinarios permitiendo una buena diferenciacin de colonias e inhibiendo la migracin del Proteus.spp4; este medio de cultivo es usado en el Hospital Julio C. Perrando de rutina para el diagnstico bacteriolgico de muestras de orina debido a que permite el aislamiento inicial y el recuento de unidades formadoras de colonias por mililitro (UFC/ml) cuando la siembra se realiza con un ansa calibrada.
La introduccin de medios cromognicos para la siembra primaria de urocultivos tambin permite realizar un recuento de UFC/ml y, adems, la identificacin de los principales patgenos a travs de los diferentes colores que adquieren las colonias luego de 18-24 hs de incubacin; esta caracterstica se basa en las reacciones en-zimticas bacterianas sobre los sustratos incorporados al medio de cultivo, necesitndose apenas unas pocas pruebas adicionales para confirmar la identidad del agente etiolgico1.
El medio cromognico CPS-ID3 desarrollado por bioMrieux incorpora sustratos cromognicos que son atacados por enzimas especficas de determinadas especies bacterianas. Este medio, junto a los sustratos para la -glucuronidasa que permiten la identificacin de E. coli, se emplean sustratos para la deteccin de -glucosidasa, enzima presente en enterococcos y en el grupo KESC (Klebsiella, Enterobacter, Serratia y Citrobacter), como as tambin incorpora triptfano para detectar la actividad de triptfano-desaminasa presente en la Tribu Proteae (Proteus, Providencia y Morganella)5. De esta manera, las colonias de Escherichia coli se observan de color rosa a bord; Enterococcus spp y grupo KESC presentan colonias verdes, Streptococcus agalactiae forma colonias color violeta, Proteus spp se observan de color marrn, Staphylococcus y levaduras de color blanca, como as tambin Pseudomonas aeruginosa, aunque sta tiene la particularidad de tener un pigmento que difunde al medio y un brillo metlico adems de su caracterstico olor frutal.
Inicialmente estudios realizados por Kass y, posteriormente otros estudios, sugirieron que el criterio de cuantifi-cacin para definir bacteriuria significativa debe ser variable para diferentes poblaciones de pacientes y tipos de muestra4.
El medio cromognico CPS-ID3 mostr un 100% de...
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