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Revista Nº 23 Setiembre - Octubre 2008

Sumario Editorial Diagnstico Bioqumico Investigacin Entrevista Bioqumica Empresarial Gacetilla Agenda Arte Bioagenda

Diagnstico Bioqumico


Fraccionamiento proteico por electroforesis capilar

Autor: Raquel Osatinsky * * Bioqumica Especialista en Qumica Clnica: Orientacin Protenas Directora del Depto. de Docencia e Investigacin y Jefa del rea Protenas de MANLAB M.T. de Alvear 2263 Dirigir correspondencia a: rosatinsky@emanlab.com.ar d

La electroforesis capilar (EC) separa molculas proteicas cargadas en funcin de su movilidad electrofortica, en un buffer a un pH dado segn el punto isoelctrico (pI) del electrolito, y un flujo electroosmtico ms o menos importante. Se la considera un mtodo intermedio entre la electroforesis de zona clsica (sobre soporte de acetato de celulosa y/o agarosa) y la cromatografa lquida.
Es un mtodo totalmente automatizado. Son dos empresas las que cuentan con stos tipos de equipos, Beckman y Sebia. En el laboratorio contamos con el Capillarys 2 de Sebia, que emplea el principio de electroforesis capilar en solucin libre. Tiene ocho capilares que funcionan en paralelo, permitiendo realizar ocho determinaciones simultneas.
El uso de capilares para la separacin electrofortica tiene mltiples ventajas. Los capilares son anticonvectivos, razn por la que no es necesario el empleo de un gel como soporte. El calor generado por el paso de la corriente elctrica, que dara lugar a problemas de temperatura, est muy reducido porque la disipacin del calor es muy efectiva.
La inyeccin de la muestra (diluida) en los capilares se realiza en el nodo por aspiracin; la separacin, aplicando una diferencia de potencial de varios miles de voltios (7.800), en los extremos de cada capilar. La deteccin directa de las protenas se lleva a cabo a partir de los 200 nm, en el extremo catdico del capilar. Se emplea buffer alcalino y el orden de la migracin de las protenas es el siguiente: gammaglobulinas, globulinas beta 2, globulinas beta 1, globulinas alfa 2, globulinas alfa 1, albmina y pre-albmina (transtiretrina).
La deteccin de las fracciones proteicas es directa; no existen los pasos: secado, coloracin y decoloracin de las corridas electroforticas como sucede con los soportes de acetato de celulosa y/o agarosa. La imagen similar a la de una electroforesis en agarosa que se observa al costado del monitor es virtual, (no existe).
Lo nico vlido es la curva que se observa en la pantalla del monitor que expresa realmente el fraccionamiento de las protenas.

Objetivo
Comunicar la experiencia de un ao de trabajo en el laboratorio con el equipo de electroforesis capilar en el fraccionamiento de las protenas sricas. De mayo 2007 a abril 2008 se procesaron 57.900 muestras.
Para validar el equipo se trabaj en paralelo las mismas muestras con electroforesis en agarosa en el Hydrasis de Sebia (990 sueros), el mtodo empleado hasta la fecha mencionada.
Asimismo, se procesaron muestras de individuos normales (de acuerdo a las normas internacionales establecidas) para obtener los valores de referencia de las distintas fracciones proteicas.

Observaciones
El mtodo de eleccin para el estudio de las protenas sricas en el laboratorio bioqumico clnico es el proteinograma electrofortico (PE). Puede realizarse por mtodos manuales y/o automatizados segn la estructura y el volumen de trabajo de cada laboratorio, el soporte empleado est condicionado por el mismo motivo.
En la EC, a diferencia de los otros mtodos, no existen los pasos correspondientes a coloracin, decoloracin y secado de la placa, pues no existe placa, sino que la lectura se realiza en forma directa sobre la muestra que circula en el capilar del nodo al ctodo. A la altura del ctodo, se encuentra el mdulo de lectura, reflejndose la misma en el monitor del equipo como una curva similar a la de una densitometra.
En su momento (1996) el Comit de Expertos en Electroforesis sealaba: La inspeccin visual de un proteinograma realizado por una persona entrenada, permite efectuar una evaluacin semicuantititva de las diversas fracciones proteicas, que dan una informacin clnica, que no se obtiene de otra manera. Esto sigue siendo vlido cuando se efectan PE con mtodos de soporte como la agarosa y/o acetato de celulosa. No as en el caso de la EC, donde la inspeccin visual se efecta sobre la curva, (que es la que corresponde a la corrida electrofortica de una muestra dada).
Considerando que la EC realiza una lectura a partir de los 200 nm, marca algunas diferencias con las curvas obtenidas por la electroforesis en agarosa. La definicin que se observa desde la zona de la albmina permite la identificacin de algunas fracciones que por otros mtodos permanecen ocultas y/o incluidas dentro de alguna de las otras fracciones conocidas.
Comenzando con la zona de la albmina, surge una de las primeras preguntas: La bis-albuminemia...
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