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Revista Nº 19 Enero - Febrero 2008

Sumario Editorial Diagnstico Bioqumico Investigacin Entrevista Bioqumica Empresarial Gacetilla Agenda Arte Bioagenda

Diagnstico Bioqumico


Citometra de Flujo en el laboratorio clnico

Autor: Mara Ins Goldaracena Bioqumica - Farmacutica Especialista de aplicaciones en Citometra de Flujo Argentina-Uruguay- Paraguay-rea Andina BD Biosciences mgoldaracena@bd.com www.bdbiosciences.com









Hace ya unos aos, que el uso de la tcnica de Citometra de Flujo se ha transformado en una herramienta indispensable en el rea clnica, ya que permite realizar el diagnstico y pronstico de diferentes patologas , as como el seguimiento teraputico correspondiente, con un alto grado de confiabilidad, sensibilidad y reproducibilidad.
Esta tcnica es un mtodo rpido cualitativo y cuantitativo de anlisis de clulas, ncleos, cromosomas, mitocondrias u otras partculas en suspensin. Permite medir informacin precisa de cada clula en particular y luego identificar distintas poblaciones celulares en mezclas complejas, diferencindolas segn: tamao, complejidad citoplasmtica y composicin antignica y bioqumica con un alto grado de especificidad, incluso cuando estn escasamente representadas.
El equipo consta de una fuente de excitacin lser que evala cada clula de la mezcla segn sus caractersticas fsicas y de fluorescencia, ya sea en membrana celular o en el citoplasma. Para el anlisis de estos parmetros se necesitan, no slo anticuerpos monoclonales unidos a distintos colorantes fluorescentes, sino tambin programas especficos de anlisis que permitan descifrar toda la informacin registrada para extraer la mayor informacin posible. La marcacin de las muestras se realiza mediante incubacin con mezcla de anticuerpos monoclonales conjugados con distintos tipos de fluorocromos o compuestos qumicos con propiedades fluorescentes. Se utilizan fluorocromos que tienen la propiedad de absorber energa de l o los lasers del citmetro, emitiendo luego fluorescencias de longitudes de onda lo suficientemente diferentes como para ser medidas en forma aislada unas de otras.
FIGURA 1: Estructura ptica bsica de un Citmetro de Flujo
Monitoreo de poblaciones linfocitarias en pacientes con VIH
La Citometra de Flujo se introdujo en el laboratorio de anlisis clnicos a principios de los aos noventa, para el anlisis de poblaciones linfocitarias en casos de pacientes infectados por el virus de VIH. Al ir descubriendo los mecanismos de esta patologa se determin que la cuantificacin en sangre perifrica de los linfocitos T Helper (CD3+CD4+) y los linfocitos T Citotxicos (CD3+ CD8+), aporta un valor pronstico y diagnstico para el paciente. Estas mediciones son muy importantes para el mdico, ya que los valores obtenidos influyen directamente en la eleccin del tratamiento para estos pacientes.
Dado que la tcnica de Citometra de Flujo nos permite informar valores porcentuales de clulas presentes en la muestra, es necesario aportar datos adicionales para realizar la cuantificacin de estas poblaciones y remitir un resultado de linfocitos T Helper en nmero de clulas por microlitro. Hay principalmente dos tcnicas utilizadas para esta cuantificacin que se denominan tcnicas de simple y doble ...
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