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Revista Nº 14 Marzo - Abril 2007

Sumario Editorial Diagnstico Bioqumico Investigacin Calidad Espacio UAPE RED Espacio CUBRA Gacetilla Agenda Arte Bioagenda

Diagnstico Bioqumico


Control de la Calidad en la Determinacin de Anticuerpos Anti-Nucleares por Inmunofluorescencia Indirecta, una materia pendiente

Autor: Dr. Orlando Gabriel Carballo Bioqumico. Unidad Inmunologa, Hospital Carlos G. Durand. Jefe del rea de Inmunologa de MANLAB. Profesor adjunto del Departamento de Biologa. Universidad Argentina John F. Kennedy. Certificado Especialista en Inmunologa,





Hargraves en 1948, que demuestra la presencia de anticuerpos anti-nucleares, es la prueba de las Clulas LE. Este fue el primer soporte de laboratorio con que cont el mdico para el diagnstico de lupus eritematoso sistmico (LES). Pero la escasa sensibilidad y especificidad de esta prueba llev a los investigadores a intentar explicar este fenmeno, y gui a una serie de laboratorios al descubrimiento que el factor responsable del fenmeno de clulas LE era una familia de anticuerpos que reconoca diferentes constituyentes nucleares. Al final de la dcada del 50, fueron desarrolladas distintas pruebas utilizando la tcnica de inmunofluorescencia indirecta (IFI) y empleando como sustratos cortes criostticos de tejidos (hgado y rin) de roedores (rata o ratn). Comparado con la prueba de Clulas LE, la IFI se mostr mucho ms sensible para el diagnstico de LES. Sin embargo, esto fue acompaado con una disminucin de la especificidad, y en un sustancial nmero de pacientes con otras enfermedades, an en individuos sanos, se vea que la prueba de ANA por IFI era positiva. En un esfuerzo por reducir el nmero de falsos positivos o resultados clnicamente irrelevantes, los laboratorios comenzaron a reportar los ttulos, esto es: la mxima dilucin del suero en la que persista la coloracin nuclear fluorescente (reaccin positiva). En general, los pacientes con LES presentaban ttulos mucho ms altos que los individuos normales o con otras enfermedades. Aunque un gran nmero de pacientes presentaban una prueba de ANA positiva y no tenan LES, algunos pacientes con LES presentaban una prueba de ANA negativa. A pesar de estas limitaciones, una prueba de ANA positiva fue incorporada como uno de los criterios diagnsticos de LES por el Colegio Americano de Reumatologa.
El anlisis de los resultados de las pruebas de ANA sobre cortes criostticos de tejidos revelaban diferentes patrones nucleares de coloracin, por lo que los laboratorios comenzaron a informar los patrones observados, por ejemplo: homogneo, moteado, nucleolar o perifrico. En un primer momento se intent relacionar el patrn con la clnica, sin embargo, la relevancia de estas asociaciones fueron ampliamente superadas por la capacidad de otras tcnicas para categorizar los resultados positivos sobre la base de la especificidad antignica del autoanticuerpo. Utilizando tcnicas como la inmunodifusin, inmunoprecipitacin, radioinmunoensayo, hemoaglutinacin o enzimoinmunoensayo se puede demostrar la reactividad de los sueros ANA positivos contra diferentes antgenos nucleares tales como: anti-dsDNA, pequeas ribonucleoprotenas nucleares como SSA/Ro, SSB/La, Sm, snRNP, enzimas tales como la Topo I (Scl-70) e histonas. La reactividad contra estos antgenos es ms especfica que los patrones y son de gran utilidad clnica.
Durante la dcada del 90, muchos laboratorios incorporaron la utilizacin de las lneas celulares como sustrato para la prueba de ANA, de stas, la ms comnmente utilizada fue la HEp-2 proveniente ...
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