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Revista Nº 11 Setiembre - Octubre 2006

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Bioqumica Empresarial


Deteccin temprana de anticuerpos anti nucleares (ANA): Clulas HEp-2000

Autor: Autor: Bioq. Patricia Etchevs

Es fcil de entender por qu la frustracin es un hallazgo frecuente entre los pacientes con enfermedades autoinmunes.

La frustracin a menudo surge por el prolongado intervalo entre el inicio de los sntomas de enfermedad y el tiempo del diagnstico formal. Para el paciente con Lupus Eritematoso Sistmico (LES), no es raro consultar 3 o ms mdicos durante 4 o ms aos antes que se establezca el diagnstico correcto. (1) En el Sndrome de Sjgren el tiempo promedio desde el inicio de los sntomas hasta el diagnstico puede ser mayor a 6 aos. (2) Hay muchos factores que contribuyen a este tiempo prolongado. Diagnosticar correctamente las enfermedades reumticas sistmicas es, a menudo, comparable a armar un rompecabezas complejo, que requiere del mdico el ensamble correcto de varias piezas para formar el cuadro completo. Los sntomas tempranos de estas enfermedades, a menudo, son vagos o no especficos de una enfermedad, por lo tanto no fcilmente interpretables. Muchos sntomas (p.e. fatiga, fiebre, artralgia) se sobreponen con sntomas de otras enfermedades y pueden involucrar distintos sistemas del organismo. Algunos mdicos pueden mirar a los sntomas individualmente y fallar en reconocer que est presente una enfermedad sistmica. (2) Por ejemplo, en el Sndrome de Sjgren, el diagnstico y tratamiento temprano son importantes para prevenir complicaciones. Los sntomas tempranos pueden mimetizarse con aquellos de otras enfermedades, incluyendo lupus, fatiga crnica y artritis reumatoidea. La sequedad que el paciente est evidenciando puede ser fcilmente atribuible a medicamentos tales como antidepresivos o agentes antihipertensivos. Mdicos y odontlogos algunas veces pueden tratar cada sntoma individualmente y no reconocer que una enfermedad sistmica est presente. (2)
Desde el punto de vista del laboratorio, ningn ensayo individual es diagnstico para estas enfermedades. Los resultados de ANA por tcnica de Inmunofluorescencia indirecta (IFI), gold standard para deteccin de ANA, requieren una interpretacin subjetiva, y an cuando son positivos, no discriminan claramente entre individuos enfermos y sanos. Los resultados de anticuerpos anti nDNA y anti ENA pueden ser piezas invaluables del rompecabezas; pero tambin, tomados en forma individual, no siempre son diagnsticos para estas enfermedades.

La falla en detectar los autoanticuerpos contribuye a demorar el diagnstico
Hay una creciente evidencia que la aparicin de autoanticuerpos puede preceder al inicio de la enfermedad, a menudo en varios aos. La deteccin temprana de estos autoanticuerpos puede ofrecer la oportunidad de un diagnstico y tratamiento temprano, mejorando el tiempo y calidad de vida del paciente. Un estudio reciente en el New England Journal reporta que en promedio, al menos 1 anticuerpo antinuclear estaba presente 3 aos antes del diagnstico clnico de LES (hasta 9,4 aos antes; media 3,3 aos); y al momento del diagnstico a menudo estaban presentes 3 autoanticuerpos.(3) Con tratamiento adecuado, la acumulacin de nuevos autoanticuerpos generalmente se puede prevenir, y la morbi mortalidad asociada a LES es mejor controlada. Los anticuerpos ms tempranamente detectados eran anti-SS-A/Ro, anti SS-B/La y anti fosfolpidos (media 3,4 aos). Otros anticuerpos antinucleares, precedan al diagnstico en menos tiempo (anti-DNA, 2,2 aos; anti-RNP, anti-Sm, 1,2 aos). El riesgo de desarrollar LES aumenta 40 veces cuando los anticuerpos anti-SS-A/Ro y/o anti SS-B/La estn presentes. (3) Los anticuerpos anti SSA/Ro se encuentran en 60% de pacientes con Sndrome de Sjgren, en 30% de pacientes con LES, en la mayora de pacientes con lupus cutneo sub-agudo y en el lupus neonatal. (4,5) Tambin se encuentran en el 5-8% de pacientes con artritis reumatoidea. (5) En la mayora de los laboratorios clnicos, el test inicial para la deteccin de anticuerpos anti nucleares, es la Inmunofluorescencia indirecta (IFI) utilizando clulas HEp-2. La lnea celular HEp-2 es ms sensible que el tejido de roedores para la deteccin de anticuerpos anti SS-A (6) y se ha convertido en el sustrato estndar para el test de anticuerpos anti nucleares. Existen numerosos proveedores comerciales de sustrato HEp-2, pero las tcnicas de produccin son variables y no existe un consenso internacional sobre las condiciones del cultivo, fijacin y secado. Mucho de la discusin sobre la calidad de los sustratos HEp-2 se ha centrado en qu tan bien se preserva el antgeno SS-A. El antgeno SS-A est presente en baja concentracin; durante el proceso de fijacin puede ocurrir difusin del antgeno desde el ncleo. La fijacin con etanol y metanol pueden causar la desnaturalizacin y el anclado del SS-A al citoplasma. (7) Por lo tanto, se ha recomendado la fijacin con acetona de las improntas con sustrato HEp-2. (8)
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